Título: Evaluación del uso de larvas de insecto como plataforma de expresión de proteínas recombinantes de interés en inmunización de peces.
Resumen: El objetivo principal del presente trabajo fue evaluar in vivo un modelo de biofactoría basado en la cría de insectos para la producción de proteínas antigénicas recombinantes con fines de inmunización oral en acuicultura. Para ello, se planteó la hipótesis de emplear las larvas del lepidóptero Spodoptera exigua y del coleóptero Tenebrio molitor como biorreactores para producir proteínas recombinantes a gran escala. Para el estudio, se administraron vía oral a través de dieta artificial que incluía encapsulados en nanoplexes los plásmidos pCMVB y pEGFP. La construcción pCMVB codifica para la enzima bacteriana β-galactosidasa, mientras que pEGFP codifica para la proteína verde fluorescente. Los resultados obtenidos en el estudio confirmaron la validez de la estrategia de transfección oral de insectos utilizando nanoplexes de ADN plasmídico (ADNp). Esto fue debido a que la nanoencapsulación garantizó la integridad y estabilidad del ADNp durante su paso por el tubo digestivo, lo que permitió que alcanzara el medio interno de las larvas, y que se expresara eficientemente en sus células. Además, no solo se logró la transfección oral de los plásmidos en las larvas de ambas especies de insectos, sino que también se observó la expresión de los genes testigo incluidos en el ADNp. Esto se pudo demostrar mediante dos estrategias diferentes¬: i) mediante la técnica de PCR cuantitativa para determinar la presencia y cantidad de ARN mensajero (ARNm) correspondiente a los genes testigo; ii) a través de la cuantificación de la actividad biológica de las proteínas codificadas por los genes testigo (lacZ y EGFP). La actividad de la proteína β-galactosidasa codificada por el gen lacZ se evaluó mediante ensayos enzimáticos específicos, mientras que la actividad de la proteína verde fluorescente (EGFP) se cuantificó utilizando técnicas fluorométricas. Estas mediciones confirmaron la producción y funcionalidad de las proteínas recombinantes en las larvas de insectos. Por su parte, la enzima β-galactosidasa bacteriana recombinante producida en larvas de Spodoptera exigua demostró ser útil en ensayos inmunológicos de titulación sérica de anticuerpos específicos utilizando la técnica de ELISA. Esto indica que las proteínas recombinantes producidas en las larvas de insectos pueden tener aplicaciones en pruebas diagnósticas, abriendo nuevas posibilidades para la producción masiva de proteínas diagnósticas utilizando larvas de insectos.
Año de defensa: 2023.
